1. 작업 단계:
1. 기계를 시작하기 전에 이동상을 여과하고 초음파 처리합니다. 물 이동상을 혼합 필터 멤브레인(0.2μm)으로 여과하고 유기 이동상을 위한 유기 필터 막 여과 후 15-20분 동안 초음파 탈기. (여과의 목적은 이동상의 불순물을 제거하여 불순물이 크로마토그래피 컬럼에 들어가는 것을 방지하고 크로마토그래피 컬럼을 막는 것입니다. 초음파의 목적은 이동상의 가스를 제거하여 가스가 크로마토그래피 컬럼에 들어가는 것을 방지하고 크로마토그래피 컬럼을 손상시키는 것입니다. 크로마토그래피 컬럼 및 컬럼 효율성에 영향을 미침)
참고: 테스트 중에 0.45μm 혼합 필터 멤브레인만 있었기 때문에 처음 사용할 때 효과가 좋지 않았으므로 물을 필터링할 때 두 개의 혼합 필터 멤브레인을 혼합했습니다. 필터막을 동시에 사용하여 물 이동상을 필터링했습니다.
2. 초음파 검사가 완료되면 이동상을 지정된 위치에 놓고(1번 펌프는 물 이동상에 연결하고, 2번 펌프는 유기 이동상에 연결) 하나씩 배기하기 위해 기계를 시작하십시오 (먼저 펌프를 시작한 다음 배기하고 감지기를 켜십시오).
3. 배기 후에는 배기 밸브를 모두 닫으세요. 먼저 베이스라인이 안정되면 물 이동상을 켜서 20~30분간 순수 유기 이동상으로 컬럼을 플러시합니다(참고: 물 이동상과 유기 이동상의 유속 합계는 1ml/분입니다). , 기준선이 안정될 때까지 기준선을 계속 실행합니다.
참고: 실험 후 크로마토그래피 컬럼을 20~30분 동안 순수 유기 이동상으로 헹구어 크로마토그래피 컬럼에 남아 있는 시료 물질을 씻어내므로 사용되지 않은 시료에 잔류 물질이 남지 않습니다. 크로마토그래피 컬럼에 침전된 후 오랜 시간이 지나면 다음 사용을 위해 크로마토그래피 컬럼을 씻어내는 것이 어려워지고 기준선이 불안정해지며 고스트 피크가 많이 나타납니다. 나타날 것입니다. (크로마토그래피 컬럼의 사양은 최대 허용 유량이 다릅니다.)
4. 기준선을 따라 이동할 때 주입 밸브는 Load 상태에 있어야 하며, 주사기로 주입할 때는 시료를 빠르게 주입해야 합니다. 샘플링 후 즉시 주입 밸브를 주입 상태로 되돌리고 액상 시스템이 샘플링 상태로 들어가기 시작합니다. 샘플링이 완료된 후 데이터분석에서 분석결과를 열람 및 편집하거나, 오프라인에서 샘플의 분석결과를 열람 및 편집할 수 있습니다.
2. 사용 중 흔히 발생하는 문제 및 주의사항
1. 여과 중 이동상 누출이 가끔 발생합니다. 가능한 이유는 필터 멤브레인이 잘못 배치되어 있고(약간 어긋남) 커넥터가 약간 잘못 정렬되어 이동상이 틈 밖으로 누출되는 것입니다.
참고: 작동 중에는 먼저 이동상을 필터병에 소량 붓고 누출 여부를 관찰한 후 누출이 없으면 필터병에 이동상을 추가해야 합니다.
2. 초음파 검사 중 병 외부의 액체 수위는 병 내부의 이동상의 액체 수위보다 높아야 합니다. 그렇지 않으면 이동상의 기체가 액체를 배출하지 못할 수 있습니다. 가스는 여전히 이동상에 남아 있어 배기 시 기포가 배출되지 않습니다.
3. 시동 및 배기 후에는 먼저 이동상 유속을 줄이고 배기 밸브를 닫아야 합니다. 그렇지 않으면 컬럼 압력이 즉시 상한 압력 이상으로 상승하여 펌프가 작동하지 않게 됩니다. 일을 멈추세요.
4. 역상 고성능 액체 크로마토그래프의 컬럼을 세척할 때 컬럼을 세척하기 위해 순수한 물 이동상을 사용하지 마십시오. 물은 극성이 높아 컬럼을 손상시킬 수 있기 때문입니다(역상- 상 고성능 액체 크로마토그래피) 컬럼 C18은 비극성임) 컬럼 효율성이 감소합니다.
5. 크로마토그래피 컬럼을 세척할 때 서로 다른 극성의 잔류 물질을 세척하기 위해 서로 다른 비율의 혼합 이동상으로 크로마토그래피 컬럼을 세척할 수도 있지만 결국에는 여전히 크로마토그래피 컬럼을 세척해야 합니다. 순수 유기 이동상으로.
6. 실험 중 압력이 상한을 초과하거나 압력이 너무 높을 수 있습니다(유기 이동상과 물 이동상의 유속의 합이 1ml/min 내에 도달하지 못함). (압력 상한) 컬럼에 문제가 있을 수 있습니다. 플러시되지 않은 잔류 물질이 있는 경우 유속이 더 큰(1ml/min 이하) 유기 이동상을 사용하여 완전히 플러시하십시오. 칼럼. 조건이 허용되면 기울기 용출을 사용하여 컬럼을 플러시할 수도 있습니다. 압력이 너무 높으면 필터 헤드가 막힐 수 있습니다. 이때 필터 헤드를 꺼내서 초음파 처리를 위해 유기 용매에 넣을 수 있습니다.
7. 액체 크로마토그래피를 다음 날 이상 사용하지 않을 경우 순수 유기 이동상을 두 이동상 병에 모두 부어야 합니다. (물 이동상을 사용하지 않으면 박테리아가 번식할 수 있기 때문입니다.) 필터 헤드와 크로마토그래피 컬럼을 오염시켜 다음에 기기를 켤 때 고스트 피크와 불안정한 기준선을 초래합니다.
8. 주입되는 시료의 양은 크로마토그래피 컬럼의 최대 부피보다 작아서는 안 되며 주입 중에 주사기 내의 기포는 배출되어야 하며 크로마토그래피에 기포가 주입되어서는 안 됩니다. 열.
작동 원리
시스템은 액체 저장소, 펌프, 주입기, 크로마토그래피 컬럼, 검출기, 기록계 및 기타 부품으로 구성됩니다. 저장소에 있는 이동상은 고압 펌프에 의해 시스템으로 유입됩니다. 시료 용액은 주입기를 통해 이동상으로 들어가고 시료의 각 성분에 의해 크로마토그래피 컬럼(고정상)으로 로딩됩니다. 용액은 두 단계에서 고유한 특성을 가지고 있습니다. 분포 계수가 다르므로 두 단계가 서로 상대적으로 이동하고 반복적인 흡착-탈착 분포 과정을 거치면 각 구성 요소는 이동 속도에 큰 차이가 있으며 개별 구성 요소로 분리됩니다. 그리고 순차적으로 컬럼 밖으로 흘러나오며, 검출기를 통과할 때 시료 농도가 전기 신호로 변환되어 기록계로 전송되며, 주로 고성능 액체 크로마토그래피의 형태로 인쇄됩니다. 샘플링 시스템, 주입 시스템, 분리 시스템, 검출 시스템 및 데이터 처리 시스템이 포함됩니다. 다음은 각각의 구성 및 특성을 설명합니다.
샘플링 시스템
일반적으로 다이어프램 주입기 또는 고압 주입실을 사용하여 주입 작업을 완료하고 주입량이 일정합니다. 이는 분석된 샘플의 재현성을 향상시키는 데 도움이 됩니다.
주입 시스템
시스템은 고압 펌프, 이동상 저장소 및 경사 측정기의 세 부분으로 구성됩니다. 고압 펌프의 일반적인 압력은 l입니다. 47~4.4X10Pa의 유량은 조정 가능하고 안정적입니다. 고압 이동상이 크로마토그래피 컬럼을 통과할 때 컬럼 내 시료의 확산 효과를 감소시키고 컬럼 내 이동 속도를 높이는 데 도움이 됩니다. 분해능 향상 및 샘플 회수, 샘플의 생물학적 활성 유지 등은 모두 유익합니다. 이동상 저장소 및 기울기 측정기를 사용하면 극성, 이온 강도, 용리액의 pH 값 변경, 경쟁 억제제 또는 변성제 사용 등 고정상과 시료의 특성에 따라 이동상을 변경할 수 있습니다. 이를 통해 다양한 물질을 효과적으로 분리할 수 있습니다(한 그룹만 다르거나 이성질체인 경우에도 마찬가지).
분리 시스템
이 시스템에는 크로마토그래피 컬럼, 연결 튜브 및 온도 조절 장치가 포함됩니다. 크로마토그래피 컬럼은 일반적으로 길이가 10~50cm(2개가 필요한 경우 둘 사이에 연결 튜브를 추가할 수 있음), 내부 직경이 2~5mm이며 고품질 스테인레스 스틸 또는 벽이 두꺼운 유리관으로 만들어집니다. 또는 티타늄 합금 입자 크기가 5~10μm인 고정상(매트릭스와 고정액으로 구성)을 포함합니다. 고정상의 매트릭스는 기계적 강도가 높은 수지 또는 실리카겔로 구성됩니다. 불활성(예: 실리카겔 표면의 염기성 규산 유전자 제거), 다공성(공극 직경 최대 1000Ω) 및 큰 비표면적은 표면이 기계적으로 코팅되어 있다는 사실과 결합됩니다. 가스 크로마토그래피에서 고정상의 제조) 또는 다양한 유전자(예: 인산염 그룹, 4차 암모늄 그룹, 하이드록시메틸 그룹, 페닐 그룹, 아미노 그룹 또는 다양한 길이의 탄소 사슬의 알킬 그룹 등) 또는 리간드에 화학적으로 결합됩니다. 이러한 유형의 고정상은 구조가 다른 물질에 대해 우수한 선택성을 갖습니다. 예를 들어 완두콩 응집소(PSA)를 다공성 실리카겔 표면에 결합한 후 섬유아세포의 당단백질을 분리할 수 있습니다. 고정상 매트릭스 입자가 작고 컬럼 베드가 사용하기 쉽습니다. 균일하고 조밀한 상태를 얻기 위해 와전류 확산 효과를 줄이기 쉽습니다. 매트릭스 입자 크기가 작고, 미세 기공이 얕으며, 질량이 큽니다. 미세기공 영역에서 시료를 이동시키는 것은 대역폭을 좁히고 분해능을 향상시키는 데 도움이 되며, 매트릭스 입자 크기가 작을수록 이론단수 N이 커집니다. 이는 작은 매트릭스 입자 크기가 분해능을 향상시킨다는 것을 더욱 입증합니다. /p>
또한, 고성능 액체크로마토그래피의 항온장치는 상온을 60C로 조절함으로써 물질 전달 속도를 향상시키고 분석 시간을 단축시켜 크로마토그래피 컬럼의 효율을 높일 수 있습니다.