1. 슬라이스 복사
파라핀 슬라이스를 37°C 오븐에 밤새 넣습니다(전날 오븐에 넣었다면 이 단계를 수행할 필요가 없습니다). .
60℃ 오븐에 2시간 굽고 탈랍하세요.
2. 탈랍 및 수화
슬라이스를 자일렌 I과 자일렌 II에 각각 10분 동안 담습니다.
각각 5분간 에탄올 농도 변화(100%, 95%, 80%, 70%).
물로 5분간 씻으세요.
TBS 3분×3, 티슈 주위를 여과지로 닦아내고 매니큐어로 따라 그려보세요.
3. 항원 회수(둘 중 하나 선택)
3.1 히알루로니다제 + 펩신 회수(권장)
히알루로니다제, 37°C에서 30분간, TBS 3분×3;
37℃에서 30분 동안 펩신, TBS 3분×3.
3.2 트립신 복구
0.125% 트립신 37℃에서 20분간, 실온에서 10분간 냉각, TBS 3분×3.
4. 블로킹
5% BSA 블로킹 용액을 37℃에서 30분간 세탁하지 않고 탈수합니다.
5. 1차 항체를 배양합니다.
1차 항체를 TBS 또는 PBS에 희석합니다. 밤새 4°C의 가습 상자에 넣습니다.
6. 2차 항체를 배양합니다.
TBS 5분×5.
슬라이스에 3% H 2 O 2 를 한 방울씩 첨가하고 실온에서 10분간 어두운 곳에 보관하세요.
중합된 HRP 표지 2차 항체를 37°C에서 30분 동안 적하합니다.
TBS 5분×5.
7. DAB 발색
DAB 발색 키트의 지시에 따라 DAB 발색액을 준비합니다.
발색을 조절하기 위해 현미경으로 관찰합니다. 시간을 두고 증류수로 마무리합니다.
8. 대조염색
헤마톡실린 대조염색(현미경 관찰 대조).
포화 인산일수소나트륨 용액이 파란색으로 변합니다.
9. 슬라이드 밀봉
탈수: 70%, 80%, 95%, 100% 에탄올에서 각각 3분간.
투명함: 자일렌 I과 II를 각각 5분 동안.
슬라이드를 중성 고무로 밀봉합니다(슬라이드를 한쪽으로 밀봉하고, 슬라이드 밀봉 시 자일렌을 제거하지 말고 슬라이드를 하나씩 올려 놓습니다).
참고: