아스피린 함량 판정에 대한 고찰 08 약학 1급 : 란선비
아스피린정은 해열진통제로 흔히 사용되는 정제로 중국약전 제2권에 수록되어 있다. 2000년판). 본래의 함량 정량법은 산, 알칼리 중화적정법입니다. 현재 시판되고 있는 해열진통제 중 대부분은 아스피린을 함유하고 있거나 아스피린을 주약으로 사용하고 있다. 중국약전의 독창적인 함량정법 외에도 제형별로 다양한 함량정법이 있다. 고성능 액상법을 사용하여 함량을 측정하면 산과 알칼리를 함유한 다른 물질의 간섭을 제거할 수 있으며 제제의 품질을 보다 효과적으로 제어할 수 있습니다. 이 방법은 작동이 간단하고 매우 구체적이며 정확한 결과를 제공합니다. 근적외선 확산 반사 기술과 같은 계산에는 수학적 모델도 사용됩니다. 원리는 화학 측정 방법을 사용하여 흡광도 등의 스펙트럼 특성 값과 근거리를 기반으로 측정할 구성 요소 간의 수학적 관계를 설정하는 것입니다. -표준 농축 시료의 적외선 스펙트럼(수학적 모델이라고도 함)
1. 아스피린 및 아스피린 제제의 함량 측정
아스피린 및 아스피린 제제의 함량을 측정하는 방법에는 산 및 알칼리 중화 적정법과
자외 분광광도법 등이 있습니다. 약전법, 고성능액체크로마토그래피법 등
1.1 아스피린 산염기 적정법:
직접 적정: 방법: 이 제품 0.4g을 취하여 정확하게 무게를 재고 중성 에탄올 20ml를 가하여 녹인 후 페놀프탈레인 첨가 지침 액체 3d, 수산화나트륨 적정 용액(0.1mol/l)으로 적정합니다. 적정제 1ml는 C9H8O4 18.02mg에 해당합니다.
가수분해 후 남은 적정: 방법: 이 제품 1.5g을 정확하게 달아 수산화나트륨 적정제(0.5mol/l) 50.0ml를 첨가합니다. 혼합하고 10분간 천천히 끓인 후 식힌 다음 페놀프탈레인 지시액을 첨가하고 남은 수산화나트륨을 황산 적정제(0.25mol/l)로 적정합니다.
2단계 적정법 : 본 제품 10정을 취하여 정확하게 무게를 재고 곱게 갈아서 정제분말 적당량(아스피린과 대략 동일)을 달아 중성주정 20ml를 가하여 흔들어 섞는다. 아스피린을 녹인 후 3일 동안 페놀프탈레인 지시액을 넣고 용액이 분홍색으로 변할 때까지 수산화나트륨 적정제(0.1 mol/l)를 한 방울씩 첨가합니다. 정량적으로 과량의 수산화나트륨적정액(0.1mol/l) 40ml를 가하여 수욕상에서 15분간 가열하고 때때로 흔들어 섞은 후 급히 실온으로 식힌 다음 남은 알칼리를 황산적정액(0.05)으로 적정한다. 정부). 소비된 적정제 부피 및 역가를 기준으로 함량을 계산합니다.
1.2 전극 방법에 따른 아스피린 제제 결정
기기 및 시약: pHs-loC 유형은 전극 전위 및 용액 산도 테스트에 사용됩니다. 디지털 산도 이온 측정기; 기준 전극은 232형 포화 칼로멜 전극이며, 시약은 모두 분석 등급이며, 실험수는 과망간산칼륨으로 처리한 후 증류된 탈이온수입니다.
전극 준비: 담체 물질 트리벤질틴 옥타노에이트 20 mgl 폴리염화비닐(PVC) 0.33g과 가소제 o-니트로페닐 옥틸 에테르 o를 결합합니다. 65g을 테트라히드로푸란(THF) 3g에 녹여 저어준 후, 40mm×40mm 가로 유리판에 붓는다. THF가 완전히 증발한 후(약 1~2시간 소요) 탄성 PVC 필름이 얻어집니다. 홀 펀치를 사용하여 직경 10mm의 디스크를 자르고 5% PVC가 포함된 THF 용액으로 PVC 전극봉 끝에 붙입니다. 건조 후 전극봉에 0.1을 채웁니다. mol/L 살리실산 나트륨 용액. 내부 기준 용액은 내부 기준 전극으로 Ag/AgCl 와이어를 사용하여 이온 측정기로 내보내집니다. 사용하기 전에 전극을 활성화를 위해 0.01mol/l 살리실산 나트륨 용액에 2시간 동안 담가야 합니다. 장기간 사용하지 않을 경우 전극과 예비 멤브레인을 세척할 수 있습니다. 질소 대기하에 보관하십시오. 이 조건에서 보관하면 전극의 성능 지표가 최소 5개월 동안 안정적으로 유지될 수 있습니다.
아스피린 제제 분석: 테스트할 시료 처리: 아스피린은 쉽게 가수분해되어 살리실산 이온을 얻으며, 반응은 정량적입니다. 따라서 살리실산 이온을 측정하여 시료 내 아스피린 함량을 구할 수 있습니다.
아스피린정(A) 및 복합아스피린정(B)의 제조방법은 약품 적당량(10정)을 가루로 하여 1~1.5g을 정밀하게 달아서 만든 것입니다. 0.5 mol/L NaOH 용액 25 ml를 1시간 동안 가열 환류시킨 후 여과하여 250 ml로 조정한다. 여액 10ml를 취하여 묽은황산으로 pH 5.5로 조정한 후 대기액으로 pH 5.5 인산완충액을 가하여 100ml로 조정한다. 장착된 전극을 사용하여 표준용액법과 시료첨가법을 통과합니다. 앞서 언급한 약물 A와 B를 각각 처리한 후 얻은 시료에서 살리실산 이온 농도를 측정하고 환산을 통해 약물 내 아스피린 함량을 계산합니다
1.3 HPLC 방법에 의한 아스피린 정제의 함량 측정
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기기 및 시약: 고성능 액체 크로마토그래프 CLASS-LC 워크스테이션. 크로마토그래피 컬럼: ODS C18 컬럼(150mm x 4.6mm, 패킹: Kromasil, 입자 크기: 5um). 시약: 아스피린 기준 물질, 메탄올(크로마토그래피적으로 순수한 시약), 빙초산, 염산(분석적으로 순수한 시약).
본 제품 20정을 정밀하게 달아 곱게 갈아 적당량(아스피린 10mg 정도 상당)을 정밀하게 달아 100m1 계량병에 넣고, 적당량을 첨가합니다. 0.1mol/l 염산용액을 초음파 처리하여 아스피린을 녹이고 실온으로 식힌 다음 0.1mol/l 염산시액을 첨가하여 표시선까지 희석하고 잘 흔들어 여과한 다음 여액 5m1을 정확하게 계량하여 넣는다. 25m1 메스플라스크에 0.1mol/l 염산용액을 넣고 표시선까지 희석하여 균일하게 섞은 후 20ul를 취하여 액체크로마토그래프에 주입하고 크로마토그램을 기록한다. 아스피린표준물질 적당량을 취하여 0.1 mol/l 염산용액을 가하여 녹이고 희석하여 ml당 약 20ul의 아스피린이 함유된 용액으로 만든 후 20ul를 취하여 같은 방법으로 계량한다. 외부 표준 방법에 따라 피크 면적으로 계산됩니다.
1.4 역학적 광도법을 통한 미량의 아세틸살리실산 측정
원리: 요오드는 Ce4와 As의 산화환원 반응에 명백한 촉매 효과가 있으며, 아세틸살리실산과 요오드는 산화환원 반응을 일으키기 쉽습니다. 요오드의 농도를 감소시키고 요오드의 촉매 효과를 약화시키는 치환 반응 따라서 역학 광도법을 통해 미량의 아세틸 살리실산을 측정하는 새로운 방법이 확립되었습니다.
기기 및 시약: 721 분광 광도계, PHS-3C 산도계, 초항온 수조. 0.01mol/lCe(SO4)2 0.013mol/L AS2O3, 5mol/l H2SO4, 5mg/l KI를 0.25mg/l로 희석하고 150mg/l 아세틸살리실산 표준 용액을 5% 스트리키닌 아세테이트로 희석합니다. 실험용수는 이중 증류수입니다.
실험 방법: 0.25mg/lKI 용액 1.0m1, 5mol/l H2S04 용액 1.25m1, 0.013mol/L AS2O3 용액 1.0ml 및 아세트산을 일련의 25m1 비색관에 정확하게 첨가합니다. 살리실산표준용액(또는 검액)에 증류수를 25m1 표시선까지 첨가한다. 잘 흔들어서 35±0.1도의 수욕에 넣는다. 항온 후 0.01mol/l Ce[S04)2 1.0ml를 넣고 즉시 잘 흔들어 준 후 빨리 다시 수욕에 넣는다. 10분간 반응시킨 후 0.5 mol/l, 0.5% 스트리키닌아세테이트를 첨가하여 반응을 종결시키고 Ce4와 함께 발색시킨 후 끓는 수욕조에 넣고 3분간 끓인 후 꺼내서 상온으로 냉각시킨다. 증류수를 기준으로 1cm 큐벳을 사용하여 파장 520nm에서 흡광도 A를 측정합니다.
2. 주약인 아스피린의 함량 판정
아스피린의 구성은 다르지만 대부분의 아스피린은 분리되어 있으며 화학적 특성이나 크로마토그래피 특성에 따라 함량을 판정합니다.
2.1 역상 고성능 크로마토그래피를 이용한 아스피린 코데인 정제의 아스피린 함량 측정
기기 및 시약: HP-1050 액체 크로마토그래프 및 UV 검출기, HP3396 일체형 기기. 코데인포스페이트기준물질, 아스피린기준물질. 메탄올, 아세트산나트륨, 빙초산은 모두 분석적으로 순수한 시약이며, 아스피린 코데인 인산염 화합물 제제(시제품)를 사용한다.
LC 조건: 크로마토그래피 컬럼 ODS C18(10mm, 300mm×4mm) 이동상: 메탄올-0.03mol/L-1 아세트산나트륨(pH=3.5로 조정하기 위한 빙초산)(1:2.5) 검출 파장 : 280nm; 유속: 1ml/min.
측정방법
혼합된 기준액을 준비하고 105°C에서 건조된 인산을 정량하여 항량한다. 코데인 참조 물질. 물에 녹여 0.8mol/l 농도의 용액을 만든다. 아스피린 기준 물질 약 40ml를 정확하게 달아 10ml 용량 플라스크에 넣습니다. 메탄올 2~3 mL를 넣어 녹이고 위의 인산코데인용액 1.0 mL를 정밀하게 넣어 물로 하여 적당량으로 희석하고 잘 흔들어 섞는다.
시험용액 조제 : 검체 미분말(인산코데인 8mg, 아스피린 400mg에 해당) 적당량을 정확하게 달아 100mL 메스플라스크에 넣고, 50mL의 물을 첨가한다. 25% 메탄올 용액을 넣고 초음파로 5분간 용해시킵니다. 25% 메탄올 용액으로 부피를 희석하고 잘 섞습니다. 0.45um 미세다공막으로 여과하고 남은 여액을 검액으로 한다.
측정 : 혼합표준액과 검액을 각각 10uL씩 정밀하게 채취하여 각각 액체크로마토그래프에 주입한다. 피크 면적을 기록합니다. 혼합표준액 중의 인산코데인과 아스피린의 피크면적에 따라 시험액 중의 두 성분의 함량을 계산한다.
2.2 소아용 투펠릭스정의 자외선 감소 스펙트럼 결정
원리: 끊어진 곡선 분석 방법은 수학적 변환 방법입니다(수학적 특성은 새로운 복합 파생 변환입니다). 조화 분석의 원리에 기초하여 스펙트럼 흡수 곡선을 여러 수학적 구성 요소의 가중치 조합으로 간주합니다. 많은 양의 정보를 제공하고 흡수 곡선의 미묘한 차이를 표시하여 유사한 성분의 수학적 상관 관계를 줄일 수 있기 때문에 물질의 질적 측면과 혼합물의 정량화에 분명한 이점이 있습니다.
기기 및 시약: UV/VIS W형 스커트 분광계 및 스커트 스펙트럼 소프트웨어; 아스피린(1) 기준 물질(함량 99.89%), 페노바르비탈(2) 기준 물질(함량 99.92%) 및 부형제( Jiamusi Chemical Pharmaceutical Factory); 소아 해열제
방법 및 결과: 기준 물질 용액 제조: 기준 물질 1과 2를 각각 적당량씩 정확하게 달아 0 ．1mol/L NaOH 용액을 용해 및 희석합니다. (용매)를 사용하여 1mg/m1 원액을 만듭니다. 그런 다음 용매로 희석하여 적절한 농도(약 120ug/m1, 22.0ug/m1, 1과 2의 흡광도가 0.2~0.8이 되도록)의 용액을 만들어 따로 보관해 둡니다. 모의시료의 제조는 원래의 흑룡강성 표준약품 처방비율을 기준으로 한다. 1과 2를 계량하여 적당량의 부형제와 혼합하고, 0.2g을 정밀하게 달아 용매와 함께 녹여 조정한다. 100m1로 5m1을 취해 250m1로 희석합니다. 16, 17, 18, 19 및 20m1을 각각 25m1 용량 플라스크에 피펫팅하고 용매로 희석하여 농도 20-25ug/m1 및 농도 2.0-2.5ug/m1의 모의 샘플 용액을 얻습니다( 0.2-1.2 사이의 1과 2의 흡광도), 최대 5개 부품.
샘플 계량 : 본 제품 12정을 취하여 정확하게 무게를 달아 곱게 갈아서 고운 가루(약 10.110g, 20.011g 상당)를 적당량 달아 소량의 물을 넣어 녹입니다. 용매를 넣고 50m1로 희석합니다. "2.3"의 방법으로 선택된 최적의 변환 간격(245-295nm)에 따라 이 간격의 스펙트럼 정보를 변환 스펙트럼을 통해 자동으로 수집하고 2성분 정량 분석 시스템 소프트웨어를 사용하여 계산을 수행하고
2.3 근적외선 확산 반사 기술로 아르기닌 아스피린의 함량을 결정합니다.
원리: 근적외선 정량 분석에는 측정할 알려진 성분이 포함된 표준 샘플 세트가 필요합니다( 표준 샘플이라고 함) 세트), 표준 세트에 있는 샘플의 근적외선 스펙트럼을 기반으로 화학계량법을 사용하여 스펙트럼 특성 값(예: 흡광도)과 측정할 구성 요소 간의 수학적 관계를 설정합니다. (수학적 모델이라고 함). 알려지지 않은 샘플을 측정할 때는 샘플의 근적외선 스펙트럼만 측정한 다음 확립된 수학적 모델을 사용하여 측정할 성분의 함량을 예측하면 됩니다.
기존 분광 정량 분석과 다른 점은 근적외선 분광 분석에 사용되는 시료를 측정 대상 성분의 스펙트럼 행렬과 농도 행렬을 풀어 수학적 모델을 구축함으로써 전처리 과정 없이 정량화할 수 있다는 점이다. 확산 반사 기술은 일반적으로 고체 시료를 감지하는 데 사용되며 투과 방식은 액체 시료를 감지하는 데 사용됩니다. 수학적 모델을 설정하는 주요 방법에는 다중 선형 회귀, 주성분 방법, 부분 최소 제곱법 등이 있습니다. 붙여넣기 알고리즘은 비교적 새로운 다변량 데이터 처리 기술입니다. 단계적 회귀 및 주성분 회귀와의 중요한 차이점은 전체 스펙트럼 영역의 각 파장을 스펙트럼 매개변수로 고려하는 동시에 샘플의 내부 구성요소도 고려한다는 것입니다. 따라서 이들 사이의 관계는 NIR 분석에 널리 사용됩니다.
기기: Bruker VECTOR22/N 근적외선 분광계, 확산 반사 섬유 프로브 파장 범위 4000-11000cm-1
샘플: 아스피린 48.0%-53.0%를 함유한 아르기닌 아스피린 고체 분말 , 자당 에스테르(정제 부형제, 윤활제로 사용됨)
실험 방법: 1/1000 토크 저울을 사용하여 서로 다른 비율의 아르기닌 아스피린과 자당 에스테르를 정확하게 칭량하고, ** *10개 부품을 균일하게 혼합하고 타정기로 눌러 다양한 아르기닌-아스피린 함량의 정제를 얻습니다(이 함량을 아르기닌-아스피린 정제의 이론적 함량 및 참값으로 사용), 각 유형별 100정. 종류별 100정 중에서 무작위로 10정을 선택하여 기기의 확산반사 섬유탐침으로 정제를 누르고 각 정제의 앞면과 뒷면을 1회 측정하여 평균스펙트럼을 시료스펙트럼으로 한다. 스캔 범위는 4000-11000cm-1이고 해상도는 8cm-1입니다. 브루커의 브루커 퀀트/2 소프트웨어로 분석하고, 스펙트럼 데이터를 가산 산란 보정으로 전처리하여 정제 표면의 차이로 인한 오차를 제거한 후 측정값을 얻을 수 있다.
2.4 아스피린 아르기닌 염 주사의 함량 측정
기기 및 시약: 기기 79-l 전자기 교반기, UV-가시광선 분광 광도계. 아르기닌, 아스피린 및 기타 시약은 분석 등급이었습니다.
표준곡선 작성: 아스피린 결정 250.0mg을 정밀하게 달아 250mL의 증류수에 현탁하고 40~50도 수조에서 녹을 때까지 계속 저어주고 식힌 후 500ml의 용액에 옮긴다. 계량병에 증류수를 표시선까지 넣고 잘 흔들어주세요. 50 mL 메스플라스크에 1, 2, 3, 4, 5 mL를 정확하게 취하고 증류수 25 mL를 넣은 후 o를 사용한다. 1mol/L NaOH용액으로 pH를 9~10으로 조정하고 끓는 수욕조에서 5분간 가열한 후 식힌 후 0.1mol/L 염산용액으로 pH를 3.0~4.0으로 조정하고 암모늄제2철 5방울을 첨가한다. 황산염 지시약을 넣고 표시선까지 증류수를 넣어 잘 흔들어 줍니다. 흡광도 A는 530nm의 파장에서 측정됩니다. 선형회귀로부터 방정식을 구합니다.
함량측정: 아스피린 아르기닌염 400.0mg을 100mL 메스플라스크에 정밀하게 달아 증류수를 넣어 녹이고 표시선까지 희석한 후 잘 흔들어 여과합니다. 계속된 여액 5 mL를 취하여 50 mL 메스플라스크에 넣고 끓는 수욕에서 몇 분간 가열한 후 식힌 다음 증류수 25 mL를 넣어 표준곡선과 같은 방법으로 측정한다. 530nm의 파장에서 흡광도 A를 측정하고 아스피린 아르기닌 염 함량을 계산합니다. 아스피린아르기닌염 함량 = (측정값/중량값) × loo%를 데이터로 대입하여 아스피린아르기닌염 함량을 구한다.
3. 아스피린의 생체 내 약물 분석:
3.1 역상 고성능 파동 크로마토그래피를 통한 아스피린 혈장 농도 측정
1 장비 및 시약: Waters2690 고성능 액체 크로마토그래프 996 다이오드 어레이 검출기 및 Millennium 데이터 처리 시스템, 와류 믹서(Shanghai Qingpu Huxi Instrument Factory), TGL-16 고속 원심분리기(Shanghai Medical Instrument Factory) 살리실산 및 벤조산 기준 물질(중국 의약품 및 생물학적 제품 관리 연구소), 인산은 분석 등급이고, 아세토니트릴은 크로마토그래피 등급입니다.
크로마토그래피 조건: 크로마토그래피 컬럼은 Diamonsil C18 컬럼(4.6mm×250mm, 5um), 이동상은 포르마잔-아세토니트릴-0.2% 인산(18:32:50), 검출은 파장은 237nm이고 유속은 1.0ml/min입니다.
용액조제 : 살리실산 대조물질 10.10mg을 정밀히 달아 포르마잔으로 녹인 후 10ml로 희석하여 1.010mg/L 살리실산 원액을 얻고, 이를 메탄올 A계로 희석한다. 다양한 농도의 용액. 안식향산 10.44mg을 정밀히 달아 포모산을 넣어 녹인 다음 10ml로 조정하여 안식향산 1.044mg/L 원액을 얻는다. 원액 1ml를 취하여 메탄올로 1ml로 희석하여 104.4ug/ml의 내부표준작업용액을 얻습니다.
샘플 처리 및 측정: 혈청 샘플 0.5nl를 정밀하게 측정하고, 내부 표준 안식향산 용액(104.4ug/m1) 50ul, 아세토니트릴 2ml를 첨가하고, 2분간 vortex하고, 15000r/min에서 5분간 원심분리합니다. 상층액 20ul를 취하여 위의 크로마토그래피 조건에서 시료를 주입하고 내부표준물질과 시료의 크로마토그램과 피크면적을 각각 기록한다. 외부 표준 방법에 따라 피크 면적으로 계산됩니다.
논의
아스피린과 그 제제에 대한 분석 방법은 여러 가지가 있지만, 나름의 유사점도 있습니다. HPLC 분석에서 검출 컬럼은 일반적으로 C18 컬럼을 사용하며 검출 파장은 약 280입니다. 적정 방법은 약물 내 유리 카르복실산의 산성도를 기준으로 하거나 가수분해 후 산으로 적정합니다. 수학적 모델과 같은 방법을 사용하는 다른 측정도 아스피린의 화학 구조와 특성을 기반으로 합니다.
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