1. 미생물 산업의 균주 요건
(1) 미생물 산업의 생산 수준은 생산 균주의 성능, 발효 및 정제 과정이라는 세 가지 요소에 의해 결정됩니다. 조건, 생산 장비. 그 중에서 생산균주의 성능이 가장 중요한 요소이다.
(2) 균주에 대한 미생물 산업의 요구 사항은 다음과 같습니다.
(1) 균주는 수확량이 많고 발효 능력이 있어 다량의 발효 산물을 생산할 수 있습니다. 단기간 내에;
(2) 발효 과정에서 부산물 및 목적 생성물과 유사한 기타 생성물이 전혀 또는 적게 생성됩니다.
(3) 강한 성장; 및 번식력, 강한 성장률, 포자 생산 균주는 강력한 포자 생산 능력을 가져야 하며
(4) 원리를 효율적으로 제품으로 변환할 수 있어야 합니다.
(5) 다양한 원료 활용 및 원료 발효가 가능함 조성 변동에 대한 민감도가 적음
(6) 첨가해야 하는 전구체 물질을 견딜 수 있는 능력이 있고, 이러한 전구체 물질 일반적인 탄소원으로 사용할 수 없습니다.
( 7) 발효 과정에서 거품이 덜 생성됩니다.
(8) 항파지 능력; 9) 유전적 안정성,
2 , 산업용 미생물 균주의 출처 및 선택
(1) 미생물 균주의 출처
일반적으로 다음과 같은 방법이 있다. 균주 수집, 샘플 수집, 분리 및 선별에 사용됩니다.
(1) 데이터를 기반으로 과학 연구 기관, 대학, 공장 또는 균주 보존 부서에 직접 요청하거나 구매합니다.
(2) 자연에서 샘플을 수집하고 분리합니다.
(3) 일부 발효 산물에서 대상 균주를 분리하고 선별합니다.
현재 발효산업에 사용되는 균주의 일반적인 추세는 야생세균에서 돌연변이세균으로, 자연선택에서 대사육종으로, 유전자 돌연변이 유도에서 유전자재조합의 방향성 육종으로 진행된다.
(2) 산업용 미생물 균주의 분리
1. 야생균주의 분리 및 스크리닝 과정
(1) 신규 균주의 분리 및 스크리닝 단계
세균 균주 분리 과정은 다음과 같습니다.
검체 채취 → 검체 재료 전처리 → 증균 배양 → 1차 균주 스크리닝 → 세균 재스크리닝 → 성능 식별 → 균주 보존
① 채취
채취시기 : 기온이 적당하고 강수량이 많지 않은 초가을이 가장 좋습니다.
토양 채굴 방법: 적합한 위치를 선택한 후 작은 삽을 사용하여 표토를 제거하고 지상 5~15cm 높이의 흙 10g 정도를 채취하여 깨끗한 크라프트 종이 봉지나 비닐 봉지에 담은 다음, 샘플링 시간, 위치, 환경 조건 등을 참고용으로 표시하고 기록합니다. 토양 시료 내 미생물 수와 유형의 변화를 최소화하려면 적시에 분리할 수 있도록 시료를 일괄적으로 점진적으로 반송하는 것이 좋습니다.
②검체 전처리
④순수종 분리: 줄무늬 분리법, 희석 분리법 등의 정제 방법을 사용하여 단일 콜로니를 얻습니다.
⑤ 고수율 균주의 스크리닝 : 본 단계에서는 생산 시와 유사한 배지 및 배양조건을 사용하여 삼각플라스크의 용량에 따라 소규모 발효시험을 실시하여 산업 생산에 적합한 균주. 균주의 발효 성능도 측정해야 합니다.
⑥독성 테스트: 일부 국가 규정에 따르면 맥주 효모, Saccharomyces fragilis, Aspergillus niger, Aspergillus oryzae 및 Bacillus subtilis 이외의 미생물은 테스트할 필요가 없습니다. 식품에 사용하는 경우 독성시험 외에 식품에 사용되는 다른 미생물도 2년 이상의 독성시험을 통과해야 합니다.
2. 세균 균주의 분리방법
(1) 선택적 압력 분리법 적용
주로 다양한 종류의 미생물의 성장과 번식을 이용하여 미생물에 영향을 준다. 온도, pH, 삼투압, 산소, 탄소원, 질소원 등과 같은 환경 및 영양 요구 사항은 다릅니다. 이러한 조건은 특정 유형 또는 유형의 미생물의 성장에 도움이 되지만 성장에 도움이 되지 않도록 인위적으로 제어됩니다. 목적을 달성하기 위해서는 다른 유형의 미생물이 생존해야 합니다. 신속한 분리 및 정제를 목적으로 합니다. 예를 들어, 배양 중 산소를 조절할 수 있으면 호기성 미생물과 혐기성 미생물을 분리할 수 있고, 온도를 조절하면 호열성 미생물과 비호열성 미생물을 분리할 수 있고, pH를 조절하면 호산성 미생물과 알칼리성 미생물을 분리할 수 있으며, 등. 선택성을 높이기 위해 다양한 항생제나 시약을 분리 배지에 첨가할 수도 있습니다. 예를 들어, 방선균과 세균을 분리할 때는 항진균성 항생제를 첨가할 수 있고, 진균을 분리할 때는 항균제를 첨가할 수 있습니다.
(2) 무작위 분리방법
일부 미생물제제의 경우 선별에 대한 직접적인 선별적 적응증이 없어 무작위 분리방법을 사용하는 경우가 많다.
A. 항생제 생산균의 분리
항생제 생산균을 분리하기 위해서는 일반적으로 Inhibition zone법이 사용됩니다.
실험에는 도구 박테리아를 사용해야 합니다. 항생제에 민감한 박테리아, 황색포도상구균 및 고초균이 전통적으로 일반적으로 사용됩니다.
B. 항종양제 생산균의 분리
항종양제 생산균의 분리를 위한 일반적인 방법: 생화학적 유도법, SOS 발색 검출법, DNA 복구 능력 돌연변이 균주. 원리는 DNA 손상을 이용하여 미생물의 돌연변이를 일으키는 것입니다.
B1. 생화학적 유도 방법: 대장균의 lacZ 유전자를 람파지의 PL 프로모터 아래에 연결하면 DNA가 손상되면 람다 억제인자 CI의 분해가 유도되고 PL 프로모터가 시작됩니다. lacZ 유전자 전사 및 발현된 β-갈락토시다제 활성을 결정하여 약물의 존재를 검출합니다.
B2. SOS 발색 검출 방법: DNA가 손상되면 yecA 단백질이 활성화되어 파지 억제 단백질을 분해한 다음 sifA 유전자가 lacZ 유전자 전사를 시작하게 하고 발현되는 ? -갈락토사이드 약물의 존재를 감지하는 효소 활동.
다. 성장인자 생산균의 분리
아미노산 생산균을 예로 들어 스크리닝 방법을 소개한다. 먼저, 항진균성 화합물(이미노사이클로헥사논 등)이 첨가된 분리배지에서 피험균을 배양한 후, 복사법을 이용하여 아미노산 생산균의 성장을 지원할 수 있는 배지에 콜로니를 복사하는 방법을 사용합니다.