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Physcomitrella patens의 조직배양

피스코미트렐라 파텐스의 성장에 필요한 영양분은 비교적 간단하고 재배가 용이하다. 물이나 무기염만 함유한 배지에서 자랄 수 있습니다. 정상적인 상황에서는 한천으로 덮인 페트리 접시나 물을 채운 삼각 플라스크를 사용하는 것으로 충분합니다. 발효조에서 현탁배양한 피스코미트렐라 파텐스(Physcomitrella patens)는 배우체에서 제거된 모든 조직이 지속적으로 배양될 수 있으며, 새로운 자생조직이 가장 빠르게 성장하는 강력한 재생능력을 가지고 있습니다.

원래 조직을 얻는 간단한 방법은 원생 조직을 균질화하여 신선한 한천 배지에 접종하는 것입니다. 이를 셀로판 층으로 덮으면 조직 성장이 느려지고 최종 조직이 단순화됩니다. 일주일 후, 배양된 조직의 대부분은 녹색 실크 세포로 구성되어 있으며 이는 원형질체를 얻기 위한 좋은 물질입니다. 표준 페트리 접시(직경 90mm)는 접종 1주일 후(25°C, 백색광) 건조 중량 50mg의 조직을 얻을 수 있습니다. 셀룰라아제로 소화하면 5×106개의 원형질체를 얻을 수 있습니다. 피스코미트렐라 파텐스(Physcomitrella patens)는 22~27°C 환경에서 가장 빠르게 성장하고 15°C에서 천천히 성장하지만 이 온도에서는 배우체 생성을 유도할 수 있습니다. 식물은 지속적인 빛 조건에서 잘 자라며, 16시간의 빛과 8시간의 어둠의 주기가 양성종 조직의 분화를 유도할 수 있습니다.

반연속 광독립영양 생물반응기를 사용하여 Physcomitrella patens의 원형질체를 배양할 수 있으며, 이 방법을 사용하면 형질전환을 위한 많은 수의 원형질체를 얻을 수 있을 뿐만 아니라 Physcomitrella patens의 원형질체도 사용할 수 있습니다. 원형질체는 단백질을 생산합니다. 2.5mmol/L 타르타르산암모늄을 첨가한 Knop 배양배지를 사용하여 2CO2를 함유한 공기를 도입하고, pH 값을 4.5~7.0으로 조절하면 최대 비생장율은 0.57/d로 얻을 수 있다. 5L 생물반응기를 사용하면 희석률 22로 하루 1100mL의 현탁 배양액을 얻을 수 있습니다. 일부 미량원소, 보조효소, 비타민 등을 배양배지에 첨가하면 원형질체 배양의 최대 생존율을 향상시킬 수 있습니다.

얻어진 Physcomitrella patens 변이체는 액체질소에 보관할 수 있으나, 계대배양을 하지 않는 경우 조직을 페트리 접시에 밀봉하여 해동하는 과정에서 조직이 죽을 수 있다. 15℃의 조건에서는 최소 1년 동안 유지가 가능합니다.