고성능 액체 크로마토 그래피의 원리와 분석 방법?

원리는 주로 다음과 같습니다:

액체-액체 분배 크로마토 그래피

(liquid-liquid partition chromatograph y) 및 화학 결합 크로마토 그래피 (chemically bonded phase chromatograph y) 흐름 상 및 고정상은 모두 액체입니다. 유동상과 고정상 사이에는 서로 용해되지 않아야 하며 (극성이 다르기 때문에 고정액의 손실을 방지함), 뚜렷한 인터페이스가 있어야 한다. 견본이 색보열에 들어가면 용질이 두 단계 사이에 분배된다. 균형을 이룰 때 고성능 액체 크로마토 그래피 계산 공식: 고성능 액체 크로마토 그래피 계산 공식

유형, 고정 상 농도에서 cs-용질; Cm-- 유동상에서의 용질 농도; Vs-고정상의 부피; Vm-이동상의 볼륨. LLPC 는 GPC 와 유사합니다. 즉, 분리 순서는 K, K 의 큰 그룹 보존 값이 크다는 것입니다. 그러나 GPC 에서 흐름은 K 에 비해 영향이 적고 LLPC 흐름은 K 에 비해 영향이 크다는 점도 다릅니다. A. 정상 액체-액체 분배 크로마토 그래피 (normal phase liquid chromatograph y): 유동상의 극성은 고정액의 극성보다 작다. B. 역액-액체 분배 크로마토 그래피 (Reverse Phase Liquid Chromatograph Y): 유동상의 극성이 고정액의 극성보다 큽니다. C. 액체-액체 분배 크로마토 그래피의 단점: 유동상과 고정상의 극성 요건은 완전히 다르지만 고정액은 유동상에서도 미량의 용해가 있다. 유동상이 색보기둥을 통과할 때의 기계적 충격력은 고정액 손실을 초래할 수 있다. 1970 년대 말에 발전한 화학 결합고정상 (뒤 참조) 은 이러한 단점을 극복할 수 있다. 현재 널리 사용되고 있습니다 (70~80).

액체-고체 크로마토 그래피

유동상은 액체이고 고정상은 흡착제 (예: 실리콘, 산화 알루미늄 등) 이다. 이것은 물질 흡착작용에 따라 분리되는 것이다. 그 작용 메커니즘은 샘플이 색상 스펙트럼 기둥에 들어갈 때 용질 분자 (X) 와 용제 분자 (S) 가 흡착제 표면 활성 센터 (샘플되지 않은 경우 모든 흡착제 활성 센터가 S) 에 흡착되어 다음과 같이 표현될 수 있다는 것이다. XMNSA = = = = = = = = XANSM Sa-- 고정상의 용매 분자; Xa-- 고정상의 용질 분자; Sm-- 유동상의 용매 분자. 흡착 경쟁 반응이 균형을 이룰 때 K=[Xa][Sm]/[Xm][Sa] 형식 중: k 는 흡착 평형 상수입니다. [토론: k 가 클수록 보존 값이 커집니다. ]

이온 교환 크로마토 그래피

(Ion-exchange Chromatography) IEC 는 이온 교환제를 고정상으로 사용합니다. IEC 는 이온 교환 수지에 이온화 가능한 이온 및 유동 이온 교환 크로마토 그래프 컬럼

동상에서 같은 전하를 가진 용질 이온을 역교환해 교환제로 서로 다른 친화력을 가지고 분리한다. 음이온 교환기를 예로 들어보죠. 교환과정은 X- (용제 중) (수지 -R4N Cl-)=== (수지 -R4N X-) Cl- (용제 중) 교환이 균형을 이룰 때: kx = [-r4nx- = KX [-R4N Cl-]/[Cl-] [토론: DX 와 유지값의 관계] 용제에서 이온화할 수 있는 물질은 일반적으로 이온 교환 색상 스펙트럼으로 분리할 수 있다.

이온 쌍 크로마토 그래피

(Ion Pair Chromatography) 이온 쌍 크로마토 그래피는 용질 분자 전하와 반대되는 이온 (이온 또는 반이온이라고 함) 을 이동상 또는 고정상에 추가하여 용질 이온과 결합하여 소수성 이온 쌍 화합물을 형성하여 용질 이온의 보존 동작을 제어합니다. 원래 이온 크로마토 그래프 공정 도식

이성은 X 수상Y- 수상상 === X Y- 유기상 중: X 수상상-유동상에서 분리할 유기이온 (양이온) 을 나타낼 수 있다. Y- 수성-유동상에서 반대 전하를 띤 이온 쌍 (예: 수산화 사부틸암모늄, 수산화 세틸 트리메틸 암모늄 등); X Y--- 형성된 이온 쌍 화합물. 균형을 이룰 때: KXY = [X Y-] 유기상 /[ X] 수상 [Y-] 수상은 정의에 따라 분배 계수는 DX= [X Y-] 유기상 /[ X] 수상수 = KXY [Y-]

이온 크로마토 그래피

(Ion Chromatography) 이온 교환 수지를 고정상으로, 전해질 용액은 유동상이다. 컨덕턴스 검출기를 범용 검출기로 사용하여 유동상에서의 강한 전해질 배경 이온이 컨덕턴스 검출기에 미치는 간섭을 제거하기 위해 억제 기둥을 설정합니다. 샘플 그룹이 분리 기둥과 억제 기둥에 반응하는 원리는 이온 교환 색상 스펙트럼과 같다. 음이온 교환 수지 (R-OH) 를 고정상으로 사용하여 음이온 (예: Br-) 을 분리하는 경우를 예로 들 수 있습니다. 음이온 Br- 유류상 (NaOH) 이 색상 스펙트럼 기둥에 들어갈 때 다음과 같은 교환 반응 (용리반응이 교환반응의 역과정임) 이 발생합니다. 본체 그림

기둥에서 발생하는 반응을 억제하다: R-H NA OH-= = R-NA H2O R-H NA BR-= = = R-NA H BR-= = R-NA H BR-= = = R-NA H BR 샘플 음이온 Br- 은 상응하는 산 H Br- 로 변환되어 전도법으로 예민한 감지를 할 수 있다. 이온 크로마토 그래피는 용액 중 음이온 분석을 위한 가장 좋은 방법이다. 양이온 분석에도 사용할 수 있습니다.

공간 배제 크로마토 그래피

(Steric Exclusion Chromatography) 공간 배제 색상 스펙트럼은 젤 (gel) 을 고정상으로 한다. 그것은 분 자체의 역할과 비슷하지만, 젤의 구멍 지름은 분 자체 보다 훨씬 더 크다, 일반적으로 나노미터에서 나노미터 수백 나노미터. 용질은 상호작용력의 차이에 따라 분리되는 것이 아니라 분자 크기에 따라 분리된다. 분리는 젤의 구멍 지름 분포와 용질의 유동 역학 볼륨 또는 분자 크기와만 관련이 있습니다. 견본이 색상 스펙트럼 기둥에 들어간 후, 흐름상에 따라 젤 외부 간격과 구멍 옆을 통해 흐른다. 샘플 중 너무 큰 분자는 접착제 구멍에 들어갈 수 없어 저항을 받기 때문에 직접 기둥을 통과해 먼저 색상 스펙트럼에 나타나고, 작은 분자는 모든 접착제 구멍에 들어가 알갱이에 침투할 수 있다. 이 그룹들은 기둥에 가장 큰 유지값을 가지고 있으며, 색상 스펙트럼에 마지막으로 나타난다.

분석 방법:

요약

스펙트럼 기둥의 충전재와 유동상의 성분은 각 품종 항목의 규정에 따라 정해져야 한다. 일반적으로 사용되는 스펙트럼 기둥 충전재는 실리콘과 화학 결합실리콘이다. 후자는 옥타 데실 실란 결합 실리카겔이 가장 일반적으로 사용되며, 옥틸 결합 실리카겔이 뒤 따른다. 시아 노 또는 아미노 결합 실리카겔도 사용된다. 이온 교환 크로마토 그래피를위한 이온 교환 필러; 젤이나 유리 마이크로볼 등은 분자 배제 색상 스펙트럼 등에 쓰인다. 주량량은 일반적으로 몇 마이크로리터이다.

달리 명시되지 않는 한, 기둥 온도는 실온이고, 검출기는 자외선 흡수 검출기이다. 자외선 흡수 탐지기를 사용할 때 사용하는 흐름은 그에 따라 자외선 분광 광도법 아래의 용제 요구 사항에 부합한다. 본문의 각 품종에 규정된 조건은 고정상 종류, 유동상 그룹, 감지기 유형을 임의로 변경해서는 안 된다. 나머지는 색상 스펙트럼 내경, 길이, 고정상 등급, 전달체 세분성, 흐름상 유속, 혼합 흐름상 각 구성 요소의 비율, 기둥 온도, 화학결합 고정상 반응

샘플량, 탐지기의 감도 등은 모두 특정 품종에 맞게 적절히 변화하여 시스템 적합성 실험의 요구 사항을 충족시킬 수 있다. 일반 크로마토 그래피는 약 20 분 안에 기록되었습니다. 2. 시스템 적용성 실험은 각 품종에 따라 기기의 적용성 시험을 요구하며, 규정된 대조품으로 기기를 실험하고 조정하는 것은 규정된 요구에 부합해야 한다. 또는 분석 상태에서 색상 스펙트럼 기둥의 최소 이론판 수, 분리도 및 후행 계수를 지정합니다.

컬럼 이론 판 수

선정 조건 하에서 시험품 용액이나 각 품종에 규정된 내표 물질 용액을 주입하고, 크로마토그래피 화학결합을 기록하여

, 시제품 주성분이나 내표물질봉의 보존시간 t(R) 와 반피크 폭 W(h/2) 를 측정하고, N = 5.54 [T (R)/W (H/2)] 2 에 따라 스펙트럼 기둥의 이론판 수를 계산합니다.

분리도

정량 분석을 할 때 정확한 측정을 용이하게 하기 위해서는 정량봉과 다른 봉우리 또는 내표봉 사이에 비교적 좋은 분리도가 필요하다. 분리도 (r) 는 2[t(R2)-t(R1)], r =-w1+w2 식의 t(R2) 는 인접한 두 피크 중 다음 피크의 보존 시간으로 계산됩니다. T(R1) 는 인접한 두 피크 중 이전 피크의 보존 시간입니다. W1 과 W2 는 이 인접한 두 봉우리의 피크 폭이다. 달리 규정되어 있지 않는 한 분리도는 1.5 보다 커야 한다.

후행 계수

측정 정확도를 보장하기 위해, 특히 최고봉법을 사용하여 측정할 경우, 테스트중인 최고봉의 후행 계수 (T) 가 각 품종 아래의 규정을 준수하는지, 또는 농도가 다른 샘플의 보정 계수 오차가 요구 사항을 충족하는지 확인해야 합니다. (데이비드 아셀, Northern Exposure (미국 TV 드라마), 측정명언) 후행 계수는 W(0.05h) T =-2D1 식의 W (0.05H) 가 0.05 피크 높이의 피크 폭으로 계산됩니다. D1 은 최대 피크와 피크 프론티어 사이의 거리입니다. 달리 명시되지 않는 한, T 는 0.95 ~ 1.05 사이에 있어야 한다. 또한 각 품종 보정 계수 측정에 따라 80%, 100%, 120% 에 해당하는 대조품 용액을 배합하고, 규정된 수량의 내표 용액을 넣고, 세 가지 농도의 용액을 각각 3 회 주입하여 평균 보정 계수를 계산할 수 있으며, 상대 표준 편차는 2.0% 를 넘지 않아야 한다.