제한적 단편 분석에 필요한 방법

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1.PCR 증폭: PCR 반응 시스템은 템플릿 2μl (약 50ng), 프라이머는 각각 1.6μl, dNTP1.6μl(0.4mM), 10×Buffer 입니다 PCR 반응 조건은 95℃ 2 분, 94℃30sec/64℃30sec/72℃30sec(5 사이클), 94℃ 30sec/63℃ 30sec/72℃ 30sec 입니다 < /p>

2.PCR 증강산물 검출: PCR 증강산물 2μl 을 받아 1 의 진지당 젤 다이빙 전기영영영영법으로 과녁 DNA 조각의 증강산물을 검출한다. < /p>

3. 효소 소화반응: PCR 산물을 약 2.0μl 로, 제한 내체효소 BstN I1U, 10× 효소 소화반응 완충액 1.0μl 로, 증발수를 10.0μl 로 채워 실험관에 넣는다. 37℃ 온도 상자에서 4h 부화. < /p>

4. 효소 제품 전기 영동 타이핑: 6 폴리 아크릴 아미드 겔 전기 영동 (T=6, C=3.3, 겔 사양은 82mm×64mm×0.75mm). 전극 버퍼액은 1×TBE 입니다. 1/5 볼륨 상위 완충액이 첨가된 효소 절산물 전기 수영, 220 v 전압, 전기 수영 2-3H 를 넣는다. < /p>

5. 은염색은 젤을 염색판에 벗겨 10 빙초산으로 30min 을 고정시켜 고정액을 제거하고 증류수로 젤을 3 회 (2min 이내) 헹구었다. 0.1 질산은용액 200ml 을 염색판에 붓고 30min 을 염색하고 염색액을 붓고 증류수는 젤을 한 번 빠르게 헹구었다 (20s 이내). 발색액 200ml(3 Na2CO3, 0.05 포름알데히드, 2‰Na2S2O3 포함) 을 염색판에 붓고 스펙트럼이 선명해질 때까지 계속 진동한다. 고정액으로 발색을 끝내다. 증류수를 한 번 씻어서 여과지에 붙여서 말리고 보존한다. < /p >