티아 졸 블루, 줄여서 MTT 라고 합니다. 세포 미토콘드리아에 있는 숙신산 탈수효소는 외원성 MTT 를 물 불용성의 푸른색 결정갑 (Formazan) 으로 되돌리고 세포에 퇴적할 수 있으며, 죽은 세포에는 이 기능이 없다. 디메틸 술폭 시드? (DMSO) 세포 중 갑을 용해시켜 효소 연쇄 면역 검출기로 570nm 파장에서 빛의 흡수를 측정하여 살아 있는 세포의 수를 간접적으로 반영할 수 있다. 특정 세포 수 범위 내에서 MTT 결정화의 양은 세포 수에 비례한다.
약물 MTT 방법 실험 단계:
부착 세포:
1. 대수기 세포를 수집하고, 세포 현액 농도를 조정하고, 구멍당 100ul 을 넣고, 판자를 깔아 테스트할 세포의 밀도로 1000- 10000/구멍을 만들고, 매번 세포를 넣은 총머리에 96 홀 주위를 붙이고, 회전이 천천히 첨가되고, 세포를 넣은 후 앞뒤로 좌우로 몇 번 흔들어서 세포 판자를 더 잘 만들 수 있다.
2. 5CO2, 37 C 부화, 세포 단층이 구멍 바닥 (96 공평판) 에 깔려 농도 구배를 첨가한 약물은 원칙적으로 세포가 벽에 붙으면 약을 첨가할 수 있다. 보통 5 ~ 7 개의 그라데이션, 구멍당 100ul, 한 줄에 12 개의 구멍, 두 개의 PBS 충전 구멍,
3. 5CO2, 37 C 부화 16-48 시간, 거꾸로 현미경으로 관찰한다.
4. 구멍당 10ulMTT 용액 (5mg/ml, 즉 0.5MTT) 을 넣고 4h 를 계속 배양한다. 약물과 MTT 가 반응할 수 있다면 원심후 배양액을 버리고 PBS 로 2 ~ 3 번 헹구고 MTT 를 함유한 배양액을 넣는다.
5. 배양을 중단하고 구멍 내 배양액을 조심스럽게 빨아들인다.
6. 구멍당 100ul 디메틸 술폰을 넣고 흔들림 침대에서 저속으로 10min 을 진동시켜 결정물을 충분히 녹인다. 효소 연합 면역 탐지기 OD490nm 에서 각 구멍의 흡광 값을 측정하다.
7. 제로홀 (배양기, MTT, 디메틸 술폭 시드) 을 동시에 설치하여 구멍 (세포, 같은 농도의 약물 용해 매체, 배양액, MTT, 디메틸 술폭 시드) 을 대조한다.