IEF 는 단백질 등전점 작동을 측정할 때 다음과 같이 주의해야 한다.
단백질의 2 차원 전기 영동의 방향은 등전초점 (Isoelectrofocusing, IEF) 으로 단백질의 등전점에 따라 분리되고, 2 위는 SDS- 폴리아크릴 젤 전기 영동 (SDS-PAGE) 으로, 아기 분자량 크기에 따라 분리된다. 전하와 분자량이 두 번 분리되면 단백질 분자의 등전점과 분자량 정보를 얻을 수 있다. 참고 필요:
1. 항상 초점과 2 방향 전기 수영 사이에 균형이 필요하다. 시간은 단백질의 성질에 따라 보통 10min 으로 15min 을 넘지 않는다.
2. 과다한 상형량은 양방향 그래픽 기형을 일으킬 수 있습니다. 특히 초점이 맞춰졌을 때 샘플 농도가 5mg 를 초과하면 단백질이 응집되고 침전되어 양방향으로 수평 및 수직 줄무늬가 생성됩니다.
3, 우 레 아 함유 시약, 일반적으로 30 C 를 초과 하지 않는 높은 온도 처리를 피해 야 한다, 그렇지 않으면 우 레 아 분해는 carboxylate formylation 을 일으킬 수 있는 carboxylate 를 생산 하 고 고르지 않은 전하를 일으킬 수 있습니다.
4. 중간에 과다한 세제는 2 차원 전기 영동지도에 심각한 영향을 미치기 때문에 초점이 맞춰지기 전에 이중 증류수로 접착제를 씻어서 잔류 세제를 제거한다.
5. 2 차원 전기 영동에서 2 차원 젤 사이의 인터페이스가 밀접하게 접촉하는 것이 중요하다. 접촉이 좋지 않거나 둘 사이에 거품이 남아 있으면 전이 시 분자가 확산된다.
등전초점 이점:
등전점 초점은 전기 수영 탱크에 전달체 양성 전해질을 넣는 것이다. 직류로 통과할 때 양성전해질은 양극에서 음극까지 점진적으로 증가하는 pH 그라데이션을 형성한다. 단백질이 이 시스템에 들어갈 때 다른 단백질은 등전점과 비슷한 pH 위치로 이동하거나 초점을 맞춘다.
전기 초점의 장점: 등전점 차이 0.01-0.02pH 단위의 단백질을 분리할 수 있는 높은 해상도가 있습니다. 일반 전기 영동은 확산작용의 영향을 받아 시간과 가는 거리가 길어지면서 띠가 넓어지고, 전기 집중은 확산 작용을 상쇄하여 띠가 좁아지는 것을 막을 수 있다. (윌리엄 셰익스피어, 윈드서머, 전기, 전기, 전기, 전기, 전기, 전기, 전기, 전기)
이런 전기집중작용으로 샘플이 어느 부위에 추가되든 간에 그 전기점에 초점을 맞출 수 있고, 매우 희귀한 샘플도 분리할 수 있다. 단백질의 등전점을 직접 측정할 수 있는데, 그 정확도는 0.01pH 단위까지 도달할 수 있다.