Western blot 실험 절차는 다음과 같습니다.
1.? 샘플 준비
1) 얼음을 만들고 얼음상자를 준비한다.
2) 세포 분해액 준비: 세포 수에 따라 필요한 분해액 결정: 50ul/ 6 판 구멍.
분해액 레시피: 100ul 벽운천분해액 +1ul 단백질효소 억제제 혼합물 +1ul PMSF
3) 실험에 따라 세포를 준비한다. 배양기 제거, 1×PBS 세 번 (배양기 중 혈청 제거), 구멍당 (6 판) 적당량의 분해액을 넣는다. 신속하게 세포로 세포를 긁어내고 1.5ml 관으로 옮겨서 빙상 20min 에 놓고 진동을 섞은 후 빙상 10min 을 설치하세요.
2.? Sds-페이지 폴리 아크릴 아미드 겔 전기 영동: 분리 접착제 (5ml/gel)
3.? 막 전이
1) 커트는 마크의 지시와 목적띠의 위치에 따라 접착제를 썰어 (플라스틱 모따기의 표시를 주의하여) 씻은 접착제를 회전막 버퍼액에 15 분 동안 담근다.
2) PVDF 막은 표시를 한 후 먼저 메탄올에 1 분 정도 담갔다가 3mm 여과지 4 장과 스펀지 4 장과 함께 전이 완충액에 15 분 동안 담근다.