BCA 단백질 농도 검사는 흡광값에 따라 단백질 농도를 추정할 수 있는 실험이다. 알칼리성 조건 하에서 단백질은 Cu2+ 를 Cu+ 로 되돌리고, Cu+ 는 BCA 와 시약 보라색 복합체를 형성하고, 두 분자 BCA 는 Cu+ 를 합친다. 이 수용성 복합물의 562nm 흡수 값을 표준 곡선과 비교하면 측정할 단백질의 농도를 계산할 수 있다.
일반적으로 사용되는 농도의 세제 SDS, Triton X-100, Tween 은 검사 결과에 영향을 미치지 않지만 킬레이트 제 (EDTA, EGTA), 환원제 (DTT, 메르 캅토 에탄올) 및 지질의 영향을 받습니다. 실험에서 샘플 희석액이나 분해액 자체의 배경 값이 높은 것을 발견하면 Bradford 단백질 농도 측정 테스트 키트 (Bradford 단백질 농도 측정) 를 시험해 볼 수 있다.
소개
2 가 구리 이온은 알칼리성 조건 하에서 단백질에 의해 1 가 구리 이온으로 환원될 수 있으며, 1 가 구리 이온과 독특한 BCA Solution A (BCA 포함) 상호 작용으로 민감한 색상 반응을 일으킬 수 있다. 두 분자의 BCA 는 구리 이온 하나를 합친 것으로 보라색 반응 복합물을 형성한다. 이 수용성 복합물은 562nm 에서 강한 흡광성을 보여 주며 흡광도와 단백질 농도는 넓은 범위에서 좋은 선형 관계를 가지고 있어 흡광값에 따라 단백질 농도를 추정할 수 있다.
실험 시약
(1) BCA 시약 준비
① 시약 a, 1L: 각각 10g BCA (1), 20gna2co3 H2O (2), 1.6gna 2c4h4 o 6 2h2o (0.16), 4g NaOH (0.4) 라고 부른다
② 시약 B, 50ml: 2G Cuso 4 5H2O (4) 를 취하고 증류수를 50ml 까지 넣는다.
③BCA 시약: 시약 A 50 인분과 시약 B 1 인분을 골고루 섞는다. 이 시약 수업은 일주일 동안 안정될 수 있다.
(2) 표준 단백질 용액: 0.5g 소 혈청 알부민을 증류수에 용해시켜 100ml 까지 성형하여 5mg/ml 용액을 만든다. 사용 시간에 10 배 희석하다.