프로모터에 대한 전사 인자의 결합을 확인하는 방법 및 원리

일반적으로 in vitro와 in vivo라는 두 가지 더 일반적으로 사용되는 방법이 있습니다.

In vitro: EMSA 사용

일반적으로 정제된 단백질과 32P 동위원소- 표지된 DNA 프로브를 사용하고(프로모터 부분을 취함) 이를 함께 배양하고 비변성 폴리프로필렌 겔 전기영동에서 복합체와 결합되지 않은 프로브를 분리한 다음 DNA-복합체는 결합되지 않은 프로브보다 느리게 움직입니다. 밴드가 천천히 움직이면 결합이 있다는 뜻입니다.

In vivo: reporter gene method

검출하고자 하는 프로모터를 설치하는 것입니다. 검출하려는 전사 인자가 세포에서 발현되거나 과발현됩니다. 전사 인자가 프로모터에 결합할 수 있으면 리포터 유전자의 발현이 시작될 수 있습니다. 형광 단백질 또는 루시퍼라제가 될 수 있습니다.

참고: 프로모터--프로모터도 프로모터로 사용될 수 있습니다.