생물학 종합 보도: 재조합 효소 중합 효소 증폭 (RPA) 은 PCR (영국 TwistDx Inc 가 개발한) 을 대체할 수 있는 핵산검사 기술로 여겨진다. TwistAmp 는 이것에 기반을 두고 있습니까? 핵산 증폭 산물은 실온에서 15 분 이내에 단분자 핵산을 검출할 수 있다. 이 기술은 하드웨어 장비에 대한 요구가 낮으며, 특히 체외 진단, 수의사, 식품안전, 생물안전, 농업 등에 적합하다.
RPA 확대의 기본 시스템 (TwistAmp? Basic) 은 우리가 프라이머와 템플릿을 준비하기만 하면 DNA 증폭에 필요한 모든 시약 들을 포함하고 있다. 이 기반체계에 다양한 효소와 프로브를 추가하면 RNA 증폭 감지 및 실시간 RPA 검사와 같은 다양한 RPA 응용 프로그램을 구현할 수 있습니다.
RPA**** * 반응에 필요한 프라이머는 몇 개입니까?
RPA 기초반응은 매번 480nM 프라이머가 필요해요, TwistAmp? Exo, TwistAmp? Fpg 와 TwistAmp? Nfo 는 한 번에 420nM 의 유인물이 필요하다. 때때로 베이스 페인트의 양을 약간 변경하여 성능을 향상시킬 수 있습니다. 서로 다른 프라이머 농도 (200nm ~ 600nm) 를 테스트하면 가장 적합한 프라이머 농도를 찾는 데 도움이 된다.
RPA**** * 반응에 필요한 프로브는 몇 개입니까?
RPA 반응은 일반적으로 매번 120nM 프로브가 필요합니다. 그러나 프로브의 농도를 약간 변경하면 반응이 촉진되는 경우도 있다. Dell 은 특정 용도에 따라 50nM 에서 150nM 까지 특정 농도 범위 내에서 프로브를 최적화할 수 있습니다.
RPA**** * 기성품 PCR**** * 프라이머를 사용할 수 있습니까?
아마 아닐 거예요. 대부분의 PCR 프라이머는 RPA 에 사용할 수 없습니다. 너무 짧고 재구성이 비효율적이기 때문입니다.
기성품 PCR**** 프로브를 RP a * * * * 에서 사용할 수 있습니까?
할 수 없어요. 일반적으로 사용되는 대부분의 PCR 프로브는 RPA 반응에 적용되지 않습니다. 특히 중합효소 5'-3' 핵산효소 활성을 사용하는 프로브 시스템은 RPA 와 완전히 호환되지 않는다.
좋은 입문서란 무엇입니까? RPA**** * 프라이머는 어떻게 설계해야 합니까?
RPA 프라이머는 엄격한 디자인 기준이 없기 때문에 선별이 필요합니다. (프라이머 디자인 참조: PCR 대체 기술, RPA 전략의 프라이머 디자인)
RPA**** * 프라이머는 얼마나 걸립니까?
RPA 프라이머는 보통 32 개에서 35 개의 뉴클레오티드 사이에 있다. 경우에 따라 30 개 미만의 뉴클레오티드 프라이머를 사용할 수 있지만 증폭 과정은 현저히 느려질 수 있습니다.
RPA**** * 프라이머는 얼마나 멀리 떨어져 있어야 합니까?
특정 애플리케이션에 따라 다릅니다. 표준 비틀림? 이 테스트 키트 는 500bp 이하의 증폭산물에 적용된다. RPA 증폭 산물의 크기는 하한이 없지만 RPA 프라이머는 일반적으로 증폭자가 80bp 를 초과해야 합니다. 증강산물은 100-200bp 사이에서 가장 빠른 RPA 증폭을 얻을 수 있다.
일정한 조건 하에서 RPA 증폭 산물은 2kb 에 달할 수 있다. 근데 지금 트위터는요? 테스트 키트 같은 큰 조각을 생산할 수 없습니다.
얼마나 많은 프라이머를 선별해야 합니까?
이것은 감지 감도에 대한 너의 요구에 달려 있다. 예를 들어, 만약 수천 개의 과녁 분자가 있다면, 대부분의 유인물은 충분하다. 감도가 매우 높으면, 시스템의 프라이머 선별을 하는 것이 가장 좋다. 필터링이 시작될 때 10 ~ 20 쌍의 후보 인용구를 가질 수 있습니다. 테스트용 유인물이 많을수록 좋은 유인물을 찾을 기회가 커진다.
RPA 확대의 기본 시스템 (TwistAmp? Basic) 은 우리가 프라이머와 템플릿을 준비하기만 하면 DNA 증폭에 필요한 모든 시약 들을 포함하고 있다. 이 기반체계에 다양한 효소와 프로브를 추가하면 RNA 증폭 감지 및 실시간 RPA 검사와 같은 다양한 RPA 응용 프로그램을 구현할 수 있습니다.
생물학 종합 보도: 재조합 효소 중합 효소 증폭 (RPA) 은 PCR (영국 TwistDx Inc 가 개발한) 을 대체할 수 있는 핵산검사 기술로 여겨진다. TwistAmp 는 이것에 기반을 두고 있습니까? 핵산 증폭산물은 실온에서 15 분 이내에 단분자 핵산을 검출할 수 있다. 이 기술은 하드웨어 장비에 대한 요구가 낮으며, 특히 체외 진단, 수의사, 식품안전, 생물안전, 농업 등에 적합하다.
RPA 확대의 기본 시스템 (TwistAmp? Basic) 은 우리가 프라이머와 템플릿을 준비하기만 하면 DNA 증폭에 필요한 모든 시약 들을 포함하고 있다. 이 기반체계에 다양한 효소와 프로브를 추가하면 RNA 증폭 감지 및 실시간 RPA 검사와 같은 다양한 RPA 응용 프로그램을 구현할 수 있습니다.
RPA**** * 반응에 필요한 프라이머는 몇 개입니까?
RPA 기초반응은 매번 480nM 프라이머가 필요해요, TwistAmp? Exo, TwistAmp? Fpg 와 TwistAmp? Nfo 는 한 번에 420nM 의 유인물이 필요하다. 때때로 베이스 페인트의 양을 약간 변경하여 성능을 향상시킬 수 있습니다. 서로 다른 프라이머 농도 (200nm ~ 600nm) 를 테스트하면 가장 적합한 프라이머 농도를 찾는 데 도움이 된다.
RPA**** * 반응에 필요한 프로브는 몇 개입니까?
RPA 반응은 일반적으로 매번 120nM 프로브가 필요합니다. 그러나 프로브의 농도를 약간 변경하면 반응이 촉진되는 경우도 있다. Dell 은 특정 용도에 따라 50nM 에서 150nM 까지 특정 농도 범위 내에서 프로브를 최적화할 수 있습니다.
RPA**** * 기성품 PCR**** * 프라이머를 사용할 수 있습니까?
아마 아닐 거예요. 대부분의 PCR 프라이머는 RPA 에 사용할 수 없습니다. 너무 짧고 재구성이 비효율적이기 때문입니다.
기성품 PCR**** 프로브를 RP a * * * * 에서 사용할 수 있습니까?
할 수 없어요. 일반적으로 사용되는 대부분의 PCR 프로브는 RPA 반응에 적용되지 않습니다. 특히 중합효소 5'-3' 핵산효소 활성을 사용하는 프로브 시스템은 RPA 와 완전히 호환되지 않는다.
좋은 입문서란 무엇입니까? RPA**** * 프라이머는 어떻게 설계해야 합니까?
RPA 프라이머는 엄격한 디자인 기준이 없기 때문에 선별이 필요합니다. (프라이머 디자인 참조: PCR 대체 기술, RPA 전략의 프라이머 디자인)
RPA**** * 프라이머는 얼마나 걸립니까?
RPA 프라이머는 보통 32 개에서 35 개의 뉴클레오티드 사이에 있다. 경우에 따라 30 개 미만의 뉴클레오티드 프라이머를 사용할 수 있지만 증폭 과정은 현저히 느려질 수 있습니다.
RPA**** * 프라이머는 얼마나 멀리 떨어져 있어야 합니까?
특정 애플리케이션에 따라 다릅니다. 표준 비틀림? 이 테스트 키트 는 500bp 이하의 증폭산물에 적용된다. RPA 증폭 산물의 크기는 하한이 없지만 RPA 프라이머는 일반적으로 증폭자가 80bp 를 초과해야 합니다. 증강산물은 100-200bp 사이에서 가장 빠른 RPA 증폭을 얻을 수 있다.
일정한 조건 하에서 RPA 증폭 산물은 2kb 에 달할 수 있다. 근데 지금 트위터는요? 테스트 키트 같은 큰 조각을 생산할 수 없습니다.
얼마나 많은 프라이머를 선별해야 합니까?
이것은 감지 감도에 대한 너의 요구에 달려 있다. 예를 들어, 만약 수천 개의 과녁 분자가 있다면, 대부분의 유인물은 충분하다. 감도가 매우 높으면, 시스템의 프라이머 선별을 하는 것이 가장 좋다. 필터링이 시작될 때 10 ~ 20 쌍의 후보 인용구를 가질 수 있습니다. 테스트용 유인물이 많을수록 좋은 유인물을 찾을 기회가 커진다.
유인물을 선별할 때 반드시 프로브를 사용해야 합니까?
꼭 그렇지는 않습니다. 모든 테스트 방법을 사용하여 후보 프라이머의 성능을 평가할 수 있습니다. 그러나 고감도 유인물을 선별하기 위해 프로브 실시간 모니터링을 통해 증폭하는 것이 가장 빠르고 수월한 방법으로 입증되었습니다.
프라이머 스크리닝에는 어떤 조건이 사용됩니까?
가능한 한 유인물 필터링 조건 (예: 템플릿의 사본 수, 샘플 순도 등) 을 시뮬레이션하는 것이 좋습니다.
주어진 프라이머의 성능을 더욱 향상시킬 수 있습니까?
일반적으로 RPA 의 성능은 프라이머의 순서를 약간 변경하여 향상시킬 수 있습니다. 주어진 프라이머는 단일 뉴클레오티드에 따라 프라이머의 길이를 약간 변경하여 최적화할 수 있습니다. 또는 프라이머 길이를 그대로 두고 1bp 를 기준으로 프라이머 위치를 이동합니다. 수정 된 프라이머의 증폭 활성을 다시 시험해야합니다.
RPA**** * 프라이머의 용융 온도는 얼마입니까?
RPA 반응은 실온에서 진행되며 DNA 해쇄는 PCR 과 매우 다릅니다. 기존의 예상 융점은 이 시스템에 적용되지 않습니다.
RPA**** * 프라이머는 특별한 정제가 필요합니까?
프라이머를 스크리닝 할 때 일반적으로 정제 할 필요가 없습니다. 다른 경우에는 프라이머의 품질이 로트 간의 차이를 초래할 수 있습니다. 일관성 요구 사항이 엄격하면 RPA 반응 전에 프라이머를 순수화하는 것이 좋습니다.
왜곡 된 우표를 통해? * * * * 테스트 키트 테스트 프라이머는 다른 TwistAmp 에서 직접 사용할 수 있습니까? * * * * 키트?
꼭 그렇지는 않습니다. 예를 들어, 트위터를 통해? Exo 및 nfo 에서 프로브를 고려하기 때문에 기본 테스트 키트 감지에 사용되는 프라이머는 exo 또는 nfo 테스트 키트 용도로 직접 사용할 수 없습니다. 또한 젤 전기 영동, 형광 검출 또는 측류 크로마토 그래피의 검출은 프라이머에 대한 요구 사항이 다르므로 일반화할 수 없습니다. DNA 검사와 RNA 검사는 일반적으로 유인물을 사용할 수 없다. 역전사 효소와 중합효소의 선호도가 다르기 때문이다.
프로브를 선택하려면 어떻게 해야 합니까?
TwistAmp 홈페이지에는 서로 다른 프로브를 감지하는 설계 가이드가 있습니다. 주목해야 할 것은, TwistAmp? 엑소 프로브에는 몇 가지 특별한 제한이 있습니다. TwistAmp? Fpg 의 프로브 설계는 더 유연하지만 TwistAmp 보다 형광 신호가 적습니까? 엑소 프로브가 강하다.
프라이머와 프로브를 사용하기 위해서는 또 무엇을 주의해야 합니까?
시스템에 프라이머와 프로브를 모두 추가해야 합니다. 이렇게 하면 조각 재구성에 편차가 생길 수 있습니다.